產(chǎn)品介紹

    胚胎干細胞一直是干細胞研究中的大明星，因為它能分化成各種器官細胞，具有最廣泛的發(fā)展?jié)摿?。從技術角度來說，"全能性"的胚胎干細胞對于治療性克隆來說是最理想的。然而，由于人類胚胎干細胞研究觸及倫理和道德，在很多國家被法律禁止，相關研究也處于進退兩難的境地，iPS細胞又稱誘導多功能干細胞的出現(xiàn)解決了這個難題。

武漢賽奧斯生物提供的人誘導多能干細胞（iPS）是由人體細胞通過非整合的方法誘導獲得。iPS在無飼養(yǎng)層、化學成分明確、并且無動物源成分的iPSMED人多潛能干細胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，適合臨床級的干細胞研究和應用。iPS在iPSMED人多潛能干細胞培養(yǎng)體系中可以長期穩(wěn)定快速增殖，具有高度近似人ES細胞的克隆形態(tài)和基因表達，長期維持正常核型，并在體內(nèi)外具有三胚層分化潛能。

貨號：SC-DRY0101

規(guī)格：1×106 

儲存條件：液氮儲存

產(chǎn)品內(nèi)容：

細胞信息：

生長曲線檢測結果：

      細胞增殖良好，倍增時間為24小時，為快速增長型細胞。

注：對于初次培養(yǎng)hiPS細胞的用戶來說，本細胞的培養(yǎng)有一定的難度，請閱讀本說明書并按照內(nèi)容進行復蘇、培養(yǎng)。

細胞傳代條件：

當滿足以下條件之一時需要進行傳代：

干細胞匯合度達到80%以上；

干細胞集落過大，中央細胞生長不良；

干細胞集落邊緣有開始分化的跡象。 

細胞傳代比例：

通常初次培養(yǎng)前幾代的干細胞需要以較低的比例傳代，如1:3；后面可以按照1:4 ~ 1:6的比例傳代， 傳代的比例由細胞株的生長速率決定。

比較理想的傳代時間間隔是3 ~ 6天一次。

細胞傳代操作流程： 

1.將人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫，取出包被過人多潛能干細胞鋪底工作液的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱中。 注：初次進行傳代操作的客戶，建議將其中一個孔加入復蘇完全培養(yǎng)基

2.吸走待傳代細胞培養(yǎng)皿/瓶中的人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基，并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一 次。

3.加入人多潛能干細胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。

4.37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱中孵育5 ~ 10分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆 內(nèi)部大部分細胞間出現(xiàn)較為明顯的間隙，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細胞消化時間 理想。

5.吸去消化液，即刻加入新鮮的人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基，用移液器扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底， 使皿/瓶底貼附的干細胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻。

注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過10次為宜。吹打過度導致大量單細胞出現(xiàn) 是造成細胞分化或死亡的重要原因。 

注：如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。 

6. 按照傳代比例吸取適量細胞懸液加入已準備好的培養(yǎng)皿/瓶中。

7. 顯微鏡下觀察細胞呈4 ~ 20個細胞大小的團塊，水平十字搖勻。于室溫放置10 ~ 15分鐘。 

8. 顯微鏡下觀察到大部分克隆貼在皿底后將細胞置于37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 

9. 每天換液直至達到可以傳代的標準。 

細胞凍存 

細胞凍存操作流程： 

1.將準備凍存的細胞取出，棄去培養(yǎng)皿/瓶中的人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基，并且加入無鈣鎂的 PBS溶液洗一次。

2.加入人多潛能干細胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。 

3. 37℃恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱中孵育5 ~ 10分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆 內(nèi)部大部分細胞間出現(xiàn)較為明顯的間隙，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細胞消化時間 理想。 

4. 吸去消化液，加入培養(yǎng)基輕柔吹打細胞于皿底呈小團塊脫落，吸取細胞懸液加入15 mL離心管 中200 g，離心5分鐘，棄上清后用無血清凍存液（iPSCMed-009）重懸細胞 注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過10次為宜。吹打過度導致大量單細胞出現(xiàn) 是造成細胞分化或死亡的重要原因。 注：如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。 

5. 按照復蘇所需要的量，1~5×106 /mL，每管1mL凍存。 

6. 直接轉移到-80℃冰箱 

7. -80℃過夜后，將凍存細胞轉移至液氮保存。 

細胞復蘇 

細胞復蘇操作流程： 

1. 將人多潛能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫；取出包被過人多潛能干細胞 鋪底工作液的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量人多潛能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基，置于37℃ 恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱中。

2. 37℃水浴解凍細胞，小心搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶，迅速取出并用75%酒精消毒凍存管外表 面，轉移至無菌操作臺中。

3. 將細胞懸液轉移至新的15mL離心管中，緩慢加入4mL 人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基，輕柔吹吸2 次混勻。

4.  200g離心5分鐘。

5. 棄上清，加入適量人多潛能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基重懸細胞，輕柔吹吸2次混勻，并接種到準 備好的培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細胞呈4 ~ 10個細胞大小的團塊。

6. 水平十字搖勻，于室溫放置10 ~ 15分鐘。顯微鏡下觀察到大部分克隆貼在皿底后，37℃恒溫CO2細胞 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。

7. 棄掉人多潛能干細胞復蘇完全培養(yǎng)基，加入新鮮的人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基繼續(xù) 培養(yǎng)，每天更換新鮮的人多潛能干細胞完全培養(yǎng)基。