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產(chǎn)品中心

CMT167 小鼠肺癌細(xì)胞

其它名稱(chēng): CMT167; CMT-167

產(chǎn)品編號(hào): CL-147m

價(jià)格: ¥3380

規(guī)格:
1×10?cells
數(shù)量: - +

詳細(xì)介紹

CMT167 小鼠肺癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào):CL-147m

細(xì)胞特性

含量:>1x106cells;

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng);

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣,多角形,邊緣不規(guī)則;

規(guī)格:T25瓶或者2mL凍存管包裝;

用途:僅供科研使用。

細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)


復(fù)蘇細(xì)胞

凍存細(xì)胞

包裝

充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

2mL凍存管

運(yùn)輸條件

常溫

干冰

保存方式

75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱

-80℃冰箱中保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復(fù)蘇

注意事項(xiàng)

① 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們;

② 請(qǐng)?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,10X20X2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù);

③ 貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收;

④ 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代。

 培養(yǎng)條件

完全培養(yǎng)基

DMEM-H完全培養(yǎng)基:90%DMEM-H+10%FBS

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度37℃;氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣;

凍存液

 50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

一、細(xì)胞復(fù)蘇:

   ①凍存管從液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速?zèng)]入37℃水浴鍋,搖晃凍存管加速溶解,以1min內(nèi)全部溶解為宜;

   ②在超凈臺(tái)中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9mL完全培養(yǎng)基的離心管內(nèi),1000-1200rpm離心5min,棄去上清液,用1-2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;

   ③將細(xì)胞懸液加入到含有5-6mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

二、細(xì)胞傳代:

   ①將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);

   ②鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落,即消化完成,否則繼續(xù)消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散;

  ③將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

   ④注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí),重復(fù)傳代操作或者凍存。

三、細(xì)胞凍存:

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:

  ①細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

  ②1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

  ③將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

注意事項(xiàng):

  ①所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

  ②建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。


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