

其它名稱: SNU387; NCI-SNU-387
產(chǎn)品編號: CL-521h
價格: ¥1500
SNU-387 人肝癌細(xì)胞
產(chǎn)品編號:CL-521h
細(xì)胞描述
該細(xì)胞系來自41歲亞洲女性。Southern blot 可檢測到乙型肝炎病毒(HBV)DNA,不表達(dá)乙肝病毒基因組RNA,需在2級生物安全防護(hù)下操作,在裸鼠中可成瘤。經(jīng)本庫STR檢測結(jié)果無誤。STR結(jié)果如下:Amelogenin: X;CSF1PO: 13,14;D13S317: 12;D16S539: 9;D5S818: 10,12;D7S820: 8,10;THO1: 7;TPOX: 8,9;vWA: 14,16。
細(xì)胞特性
來源:女性,41歲 肝
形態(tài):上皮樣,貼壁細(xì)胞
含量:>1x10?cells
規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
用途:僅供科研使用
細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)
復(fù)蘇細(xì)胞 | 凍存細(xì)胞 | |
包裝 | 充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 1mL凍存管 |
運(yùn)輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復(fù)蘇 |
注意事項(xiàng) | ① 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們; ② 請?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照,10X和20X各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù); ③ 貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在運(yùn)輸過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收; ④ 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
完全培養(yǎng)基 | RPMI-1640 87% +優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10% +GlutaMAX-1谷氨酰胺 1% +Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1% +P/S青霉素-鏈霉素 1% |
培養(yǎng)條件 | 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%;溫度:37℃;培養(yǎng)箱濕度為70%-80% |
凍存液 | 90%血清+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配) |
細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作
(一)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,1000rpm/min離心3~5min,棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
注意:建議復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩,避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸造成人員傷害。
(二)細(xì)胞傳代
① 待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
② 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,吸凈殘余的PBS。
③ 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),顯微鏡下觀察細(xì)胞大部分變圓并脫落,即可輕拍培養(yǎng)瓶至細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺,加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基終止消化。
④ 輕輕打勻后吸出,將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000rpm/min離心3-5min,棄去上清液。
⑤ 向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按1:1比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中,添加6~8mL完全培養(yǎng)基,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
(三)細(xì)胞凍存
① 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×10^7個活細(xì)胞/ml。
② 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,按每1ml凍存液含1×10^6~1×10^7個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息
③ 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80℃冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
建議:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
注意事項(xiàng):
所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
地址:湖北省武漢市東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷三路778號
自貿(mào)生物創(chuàng)新港9層
郵箱:service@51cells.cn
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