C166 小鼠血管內皮細胞

產品編號：CL-130m

細胞特性

形態(tài)：上皮細胞樣，多角形，貼壁生長

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 2mL凍存管x2支（干冰運輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

收貨須知

收貨當天發(fā)現異常，請在 24 小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好！

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮。復蘇時每管一次用完不得留存；

T25形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置 2-3h，再對細胞進行常規(guī)操作。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）細胞復蘇

①　凍存管從液氮或-80℃中取出放入 PE 手套中，迅速沒入 37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以 1 分鐘內全部溶解為宜；

②　在超凈臺中將溶解好的細胞液加入到裝有 9ml 完全培養(yǎng)基的離心管內，1000-1200rpm/min 離心 5 分鐘，棄去上清液，用 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸細胞；

③　然后將細胞懸液加入到含有 5-6mL 完全培養(yǎng)基的 T25 瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（二）細胞傳代

①　將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 1-2mL 胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

②　鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打 細胞層某處，肉眼可見細胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰酶，加入  5-6 毫升完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

③　將細胞懸液按 1:2 比例分到新的 T25 瓶中，添加適當的完全培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

④　注意培養(yǎng)基 pH 值變化和細胞密度，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到  80%-90%時，重復傳代操作或者凍存。

注意事項：①細胞具有密度依賴性，首次傳代（密度達到 80%），建議 1:3 傳代（保持細胞密度），且優(yōu)先在 T25 瓶中。②密封培養(yǎng)瓶的話，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松。