MOVAS 小鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-116m

一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

1999年12月通過(guò)膠原酶-彈性蛋白酶消化分離的原代血管主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞用編碼SV40大T抗原以及新霉素抗性基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。在 0.4 mg/ml G418 存在下選擇克隆并通過(guò)有限稀釋進(jìn)行亞克隆。來(lái)源ATCC（CRL-2797）。

二、細(xì)胞特性

來(lái)源：C57BL/6小鼠 心; 主動(dòng)脈；平滑肌

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，多角形，貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：氣相：5%CO?+95%AIR；溫度：37℃；培養(yǎng)箱濕度：70%-80%

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/2mL凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動(dòng)物或人類(lèi)治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：

89%DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清 + 1%雙抗 + G-418（0.2mg/mL）

四、細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請(qǐng)?jiān)?/span>24小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮。

T25瓶形式：收貨后于培養(yǎng)箱中靜置2-3h，再對(duì)細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。請(qǐng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度在60%以下，去除培養(yǎng)瓶中舊培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中），加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到70%-80%或以上，可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

注意：運(yùn)輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)要求配制的新鮮完全培養(yǎng)基。收到細(xì)胞后第一次傳代建議使用T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

注意：建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管因溫差變化發(fā)生爆炸造成人員傷害。

（二）細(xì)胞傳代

細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代，步驟如下：

① 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

② 加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

③ 輕輕打勻后吸出，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1~2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2比例分到2個(gè)新的培養(yǎng)瓶中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（三）細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

① 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。

② 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用細(xì)胞凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代 數(shù)、日期等信息。

③ 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。