一.細(xì)胞描述

原始腫瘤的形態(tài)學(xué)不符合小細(xì)胞肺癌（SCLC）的特征。該細(xì)胞系在生化和形態(tài)學(xué)上是SCLC的變種，表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇酶和肌酸激酶的腦同工酶。它的L-DOPA脫羧酶或蛙皮素的表達(dá)量未達(dá)到可檢測水平。該細(xì)胞產(chǎn)生一個異常大小的p53 mRNA（3.7 kb）。該細(xì)胞的C-myc DNA序列擴(kuò)增約25倍，c-myc RNA比正常細(xì)胞增加24倍。據(jù)報道該細(xì)胞表達(dá)功能性ANP受體，但用ANP處理不會改變其生長方式。該細(xì)胞的神經(jīng)絲和波形蛋白染色呈陽性，表達(dá)v-fes，v-fms，Ha-ras，Ki-ras，N-ras和c-raf 1 mRNA。經(jīng)本庫STR檢測無誤，

STR鑒定結(jié)果為：Amelogenin: X ,CSF1PO: 11,11, D13S317: 8,8, D16S539: 12,12,D5S818: 12,12,     D7S820: 10,13,TH01: 9,9.3,TPOX: 11,11,vWA: 14,14

二.細(xì)胞特性

（1）來源：人  來源于轉(zhuǎn)移灶：胸腔積液

（2）形態(tài)：上皮樣、懸浮成團(tuán)

（3）含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

（4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

（5）用途：僅供科研使用。

三.推薦培養(yǎng)基

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基  87%，優(yōu)質(zhì)胎牛血清  10%，GlutaMAX-1谷氨酰胺    1%，Sodium Pyruvate丙酮酸鈉   1%，P/S青霉素-鏈霉素   1% 。

備注：nci-h82 細(xì)胞懸浮聚集體，細(xì)胞以非常大的聚集體生長，聚集體是唯一的活細(xì)胞群。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四.運(yùn)輸和保存

（1）凍存細(xì)胞：1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）復(fù)蘇好的活細(xì)胞：T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理：

（1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

（2）請在4或5x顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

（3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

（4）注意：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

細(xì)胞處理：

（1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

（2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4mL含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

（3）細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面以T25瓶為例：

（1）細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL。

（2）1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

（3）將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存，同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。