Vascular Smooth Muscle Cell Calcification Kit

血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

由SAIOS團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒，包括適合血管平滑肌細(xì)胞鈣化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、鈣化因子和雙抗。

本產(chǎn)品可增強(qiáng)VSMCs細(xì)胞的鈣化能力。 本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

試劑盒組成成分

使用方法

血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基的配制

1.   使用前，請(qǐng)將鈣化因子置于2-8℃環(huán)境中過夜解凍直至鈣化因子完全溶解，解凍后輕晃試劑瓶以確保鈣化因子混合均勻，隨后即可使用。

注意：解凍后的鈣化因子中可能會(huì)含有少量絮狀沉淀，這些物質(zhì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量無影響。不建議采取 過濾的方法去除沉淀物，此操作會(huì)導(dǎo)致鈣化因子中部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失。

2.  用75%乙醇擦拭試劑盒中各瓶/管的開口外壁，室溫放置數(shù)秒使酒精揮發(fā)。

3. 在超凈臺(tái)中無菌地打開以上各瓶/管。

4. 將25 mL鈣化因子和2 mL雙抗全部加入173 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即可配 成200  mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基。

注意：

① 無菌吸取少量基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌各瓶/管，盡可能的將所有組分完整的加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。

② 輕晃配制好的完全培養(yǎng)基，確保混合均勻之后即可使用。

③ SAIOS完全培養(yǎng)基試劑盒中的每個(gè)成分均為無菌分裝，但為確保完全無菌， 也可以將混合后的完 全培養(yǎng)基進(jìn)行再次過濾除菌（0.22 μm 濾膜）。

培養(yǎng)器皿表面的包被

 為了避免誘導(dǎo)過程中血管平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)漂浮現(xiàn)象，建議對(duì)鈣化誘導(dǎo)使用的培養(yǎng)器皿表面用促貼壁試劑包被。

 所需材料

促貼壁試劑（AS01-001D）

 操作

1.  加適量促貼壁試劑到培養(yǎng)器皿中，能覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿底面的量即可。

2. 搖勻液體使其覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿的底面。

3.  將鋪有促貼壁試劑的培養(yǎng)器皿放置在超凈臺(tái)至少30min。

4.  30 min后棄去促貼壁試劑，待培養(yǎng)器皿晾干后，即可用于接種細(xì)胞。

注意: 包被促貼壁試劑的培養(yǎng)器皿在無菌和不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。

血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化操作規(guī)程

所需材料

? 0.25% 胰蛋白酶-EDTA（貨號(hào)：RC-009）

? Phosphate-Buffered Saline (1×PBS) （貨號(hào)：RC-0800）

? 血管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基（貨號(hào)：PM-004）

? 血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒（貨號(hào)：YD-005）

 操作

注意：本操作規(guī)程以六孔板為例

1.  將血管平滑肌細(xì)胞置于37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.  當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%時(shí)，用0.25% 胰蛋白酶-EDTA進(jìn)行消化。

3. 將消化下來的血管平滑肌細(xì)胞按照2×104 cells/cm2 的細(xì)胞密度接種在事先包被促貼壁試劑的六孔 板中，每孔加入2 mL完全培養(yǎng)基。。

4.  將細(xì)胞置于37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5.   當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%左右時(shí)，小心的將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入2 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基。

6.   每隔2-3天換用新鮮的血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基（使用前需預(yù)熱至37℃）

7. 誘導(dǎo)15-20天后，視細(xì)胞的形態(tài)變化及生長(zhǎng)情況，用鈣化鑒定試劑盒進(jìn)行染色。 

注意：為防止誘導(dǎo)后的細(xì)胞脫落，建議鈣化過程中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊績(jī)商煲?/span>次半量換液。

 產(chǎn)品穩(wěn)定性及保存條件

1.所有產(chǎn)品均需避光保存。

2.保存條件及有效期

3.所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用，超過保質(zhì)期，必須放棄使用。

4.為確保產(chǎn)品效果，請(qǐng)避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。

質(zhì)量控制

血管平滑肌細(xì)胞鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)基已用各種屬血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行了性能測(cè)試。 主要的鑒定標(biāo)準(zhǔn)包括：

?  無菌檢測(cè)（細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè)）

?  pH測(cè)試

?  滲透壓檢測(cè)

?  內(nèi)毒素檢測(cè)