間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒

產(chǎn)品編號：MSCYD-002

產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品為SAIOS團隊精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒，可增強間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化的能力。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

試劑盒組成成分和保存

注意：

1.為保證產(chǎn)品的有效性，請避免反復(fù)凍融。

2. 配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據(jù)實驗用量合理配制。

質(zhì)量控制

間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基已用間充質(zhì)干細胞進行性能測試。主要的鑒定標準包括：

· 無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）

· pH測試

· 滲透壓檢測

· 內(nèi)毒素

產(chǎn)品使用說明

1. 間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制

①室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正常現(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）

（注意：若因子或血清中有沉淀物，屬正?，F(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）

②根據(jù)實驗用量，于無菌操作臺中配制完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，先加細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清，再加誘導(dǎo)分化添加劑。配制比例見下表：

2. 間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化實驗步驟

①包被細胞培養(yǎng)瓶/板：向細胞培養(yǎng)器皿中加入0.1%明膠溶液，輕微晃動，使包被液完全覆蓋培養(yǎng)器皿底面，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育30min，吸除液體即可使用。

②建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細胞，將其消化收集，使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度，均勻鋪于包被好的培養(yǎng)瓶/板中，置于37℃，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞接種詳情參考下表：

                                        表 二

③待細胞匯合度達約90%時，即可進行誘導(dǎo)分化。

④小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預(yù)熱。）

⑤每2~3day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時，若細胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細胞量較大，營養(yǎng)消耗較快導(dǎo)致的，請及時縮短換液周期。

⑥細胞誘導(dǎo)2~4周后，即可進行茜素紅染色鑒定。（注意：請在顯微鏡下確認鈣結(jié)節(jié)形成后，再進行染色鑒定。）

3. 茜素紅染色分析

① 細胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次，室溫固定30 min。（細胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）。

②吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，染液體積請參考表二，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）

③吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。（注意：染色液可重復(fù)使用，建議收集。）