P815小鼠肥大細胞瘤細胞

產品編號：CL-074m

細胞介紹

P815細胞吞噬小粒乳汁但不吞噬酵母聚糖或卡介苗。 沒有抗體依賴的細胞毒作用。 硫酸右旋糖苷、LPS或PPD不能抑制細胞生長。 檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 在本庫通過支原體檢測。

細胞特性

來源：小鼠 肥大細胞；肥大細胞瘤

形態(tài)：懸浮，部分輕微貼壁生長。貼壁細胞可用刮刀刮下后繼續(xù)培養(yǎng)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25x1瓶（常溫運輸）/ 2mL凍存管x2支（干冰運輸）

用途：僅供科研使用

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

細胞接收注意事項

收貨當天發(fā)現異常，請在24小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好!

凍存管形式：收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮。復蘇時每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h；②請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為收到細胞時的狀態(tài)依據。③顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收；④運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

注意事項：

①　復蘇的P815活細胞收到之后，細胞多數呈懸浮狀態(tài)，可能有些許細胞貼壁。請將全部細胞懸液轉移到離心管，將剩下貼壁的細胞吹打脫壁后（刮刀刮下）一并收集，1000rpm離心5min，加入10-15ml培養(yǎng)液重懸后移植到2個T25培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)。

②　傳代周期：以20萬細胞/ mL密度開始培養(yǎng)，并在培養(yǎng)過程中維持細胞密度在10萬細胞/毫升到100萬細胞/mL。

③　傳代比例：以20萬細胞/毫升密度開始培養(yǎng)，并在培養(yǎng)過程中維持細胞密度在10萬細胞/ mL至100萬細胞/ mL。

細胞復蘇、傳代、凍存操作

（一）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

（二）細胞傳代

待細胞密度達到70%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)：

①　收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中；

②　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化；

③　將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpm離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

（三）細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例：

①　細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL；

②　1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/mL分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息；

③　將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

①　所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

②　建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。