H22 小鼠肝癌細(xì)胞

產(chǎn)品編號(hào)：CL-003m

一、細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系分離自小鼠腹水，由大連醫(yī)科學(xué)院建立。

二、細(xì)胞特性

來源：小鼠 腹水

形態(tài)：淋巴母細(xì)胞，懸浮生長(zhǎng)

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運(yùn)輸）/ 含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管x2（干冰運(yùn)輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用，不可用于動(dòng)物或人類治療或診斷用途

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細(xì)胞完全培養(yǎng)基為：RPMI-1640培養(yǎng)基 + 10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清 + 1%雙抗

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃，95% Air，5% CO?

3) 凍存液：90%血清+10%DMSO，或使用本公司即用型無血清細(xì)胞凍存液

四、收貨注意事項(xiàng)

1) 凍存細(xì)胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，一支凍存管按照說明書要求盡快復(fù)蘇，另一支轉(zhuǎn)入液氮儲(chǔ)存。如果第一支復(fù)蘇效果不理想，需及時(shí)聯(lián)系反饋，在我方技術(shù)指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支凍存細(xì)胞。

2) 復(fù)蘇細(xì)胞：收到細(xì)胞后，用75%酒精擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部，不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜置2-4h以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務(wù)依據(jù)。

3) 對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞：靜置后將T25培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm離心5min，棄去上清液，加入1-2mL完全培養(yǎng)基重懸，按1：2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8mL/瓶，放入37℃，5%CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。若培養(yǎng)瓶為密封瓶蓋須擰松瓶蓋。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將細(xì)胞凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內(nèi)容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，用5mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，接種到T25培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO?細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意：在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和佩戴防護(hù)面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細(xì)胞傳代（細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)）

方法一（離心法）：將細(xì)胞懸液收集到離心管中，1000rpm離心5min，棄去上清，加入1-2mL完全培養(yǎng)基重懸，按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8mL/瓶，放入37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

方法二（半量換液法）：將T25瓶豎起來，在培養(yǎng)箱靜置10-20分鐘，肉眼可見大部分細(xì)胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起混勻，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-8mL完全培養(yǎng)基的T25瓶中，放入37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。半量換液3次可以離心傳代一次。

三、細(xì)胞凍存

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。步驟如下：

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞放入程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。