HEK-293T 人胚腎細胞

產(chǎn)品編號：CL-209h

一、 細胞簡介

HEK-293T細胞是293T（293tsA1609neo）細胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。細胞持續(xù)表達SV40抗原，該細胞常用于轉染實驗，轉染效率較高。轉染一般以50%密度鋪板，待細胞剛剛貼到皿壁上后（一般8-10小時），即可進行轉染操作。

二、細胞特性

來源：人胚胎腎臟

形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長，貼壁能力較弱

含量：>1x10?cells

規(guī)格：T25瓶x1（常溫運輸）/ 含有1mL細胞懸液的凍存管x2（干冰運輸）

用途：本產(chǎn)品僅供實驗室研究使用，不可用于動物或人類治療或診斷用途

注意：該細胞為疏松貼壁生長，在運輸過程中發(fā)生細胞脫落，這是正常現(xiàn)象，傳代換液時請輕柔操作。

三、完全培養(yǎng)基及凍存液配制

1) 該細胞完全培養(yǎng)基為：DMEM＋10%FSB＋1%P/S

2) 培養(yǎng)環(huán)境：37℃；95% Air，5% CO?；濕度為70%-80%

3) 凍存液：推薦使用非程序無血清細胞凍存液（貨號：RC-0102）

四、收貨注意事項

1) 凍存細胞：收貨后檢查干冰融化、凍存管是否破損及瓶蓋脫落情況。如無異常情況，1支凍存管按照說明書要求盡快復蘇，另一支轉入液氮儲存。如果第一支復蘇效果不理想，需及時聯(lián)系反饋，在我方技術指導下復蘇第二支凍存細胞。

2) 復蘇細胞：收到細胞后，用75%酒精擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部，不拆封口膜將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3h以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后在顯微鏡下觀察細胞生長情況、檢查有無微生物污染現(xiàn)象、拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)，前三天所拍照片將作為售后服務依據(jù)。

3) 對于貼壁能力弱的細胞：如收到貨后，發(fā)現(xiàn)大片細胞聚團脫落，將培養(yǎng)瓶內所有培養(yǎng)基離心收集，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清；沉淀加入 1mL 胰酶輕輕吹打消化約 1 分鐘，加入 5mL 完全培養(yǎng)基終止消化，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清；用 1-2mL 完全培養(yǎng)基吹勻，接種至 2 個含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，第二天給細胞換液。。

細胞培養(yǎng)操作說明

一、細胞復蘇

1. 將含有1mL細胞懸液的凍存管快速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖晃加速溶解，直至凍存管中無結晶，然后用75%酒精擦拭凍存管外壁。

2. 將凍存管內容物加入到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm離心5min。

3. 棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻，接種于T25培養(yǎng)瓶中，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

4. 第二天換液并檢查細胞密度。

注意：在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和佩戴防護面罩，避免凍存管爆炸造成人員傷害。

二、細胞傳代：細胞密度達80%-90%，即可進行傳代

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），常溫消化 0.5-1min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000rpm 離心 5-8min，棄去上清液，補加 1-2mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。

4. 按5-6mL/瓶補加完全培養(yǎng)基，將細胞懸液按 1:3 ~ 1:4 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。步驟如下：

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/mL。

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清，用細胞凍存液重懸細胞，按每1mL凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞放入-80℃冰箱中，24h后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中 的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。